蚋类是医学昆虫中一类重要的媒介昆虫，可通过刺叮吸血传播疾病 [1]。蚋类具有突出的形态相似性，种属鉴定通常需要不同发育时期(包括幼虫、蛹和成虫)的成套标本，对单一虫期标本的鉴定往往十分困难[2]。DNA条形码技术为Hebert等[3]于2003年提出，核心思想是以线粒体COI基因5＇端一长658 bp的序列(称为DNA条形码)作为鉴定动物物种的通用遗传标记，且该技术在双翅目[4-5]、直翅目[6]、膜翅目[7]、蜻蜓目[8]等昆虫的物种鉴定上得到了很好的应用，本课题组张圣芳等[9]在此基础上进行改良并成功运用于贵州省雷山、江口、德江、关岭和开阳5县采集的蚋类鉴定。贵州威宁草海国家级自然保护区位于贵州省西北部，是贵州省重要旅游和畜牧资源。查阅文献发现，关于该地区吸血蚊、蚋类仅见零星报道[1-2,10-11]，研究记述十分匮乏。2017年8月，本课题组收集贵州威宁草海国家级自然保护区内水环境积水或流水中水生植物和石头上的蚊蚋类幼虫及蛹，并采用常规形态法和DNA条形码技术对其蚊蚋相进行鉴定。

1 材料与方法

1.1 标本来源

采集地点为环绕贵州威宁草海国家级自然保护区内的有水环境：草海观景亭(N26°51′56″，E104°14′10″)、草海羊关山(N26°51′58″，E104°13′2″)、王家院子(N26°49′35″，E104°14′18″)、 威宁大桥(N26°52′57″，E104°12′39″)、彭家营(N26°49′29″，E104°11′33″)、洗羊塘山(N26°49′4″，E104°11′38″)、小东山(N26°49′30″，E104°12′30″)、薛家海子(N26°49′10″，E104°12′19″)、洒林头(N26°48′25″，E104°12′51″)及金钟镇胡家树林(N26°47′4″，E104°23′7″)。用水瓢收集以上区域的排水渠、草海沿岸等积水中或流水中水生植物和石头上的蚊类幼虫和蛹，部分蚊、蚋类蛹用于羽化获取成虫，蚋类羽化方法见文献 [1]。采集标本放入95%酒精固定，保存于贵州医科大学生物教研室，用于后续研究。

1.2 方法

显微镜(SMZ18，日本Nikon)下初步分类，蚊类鉴别参照文献 [1,10]。蚋类鉴别先经常规解剖方法制作标本玻片，中性树胶封片[11]，根据文献记载进行分类鉴别[10，12-14]。形态学鉴定参考文献[9]，DNA条形码技术的总DNA提取、条形码序列的PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳等条件沿用本课题组常规方法[9]。条形码序列扩增选用COI基因通用引物[15]：Lco1490(5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTG G-3’)及Hco2198(5’-TAAACTTCAGGGTGACCA AAAAATCA-3’)，由上海生工生物技术有限公司合成；产物大小约为710 bp，扩增产物送至上海生工生物技术有限公司进行双向测序；利用DNAMAN V6拼接序列，切去引物片段，获COI基因658 bp序列。利用BOLDSYSTEMS (

2 结果

在保护区沿岸共采集到蚊幼虫400余条，育出成虫68头；蚋蛹400头、幼虫1 000余条，育出成虫159头；经鉴定为蚊科(Family Culicidae Meigan，1818)2亚科3属共10种，占贵州省记述种9.17%；蚋科(Family Simuliidae Newman，1834)1亚科1属共8种，占贵州省记述种21.62%；此次调查亦见贵州省新记述五指库蚊、窄足真蚋和昌隆蚋。蚊科10种分布名录见表1，蚋科8种分布名录见表2。

3 讨论

根据文献《贵州野生动物名录》[16]、《宽阔水景观昆虫》[17]、《茂兰景观昆虫》[18]、《赤水桫椤景观昆虫》[19]、《习水景观昆虫》[20]、《梵净山景观昆虫》[21]、《麻阳河景观昆虫》[22]、《贵州大沙河昆虫》[23]、《雷公山景观昆虫》[24]、《贵州望谟苏铁自然保护区科学考察集》[25]，以及近40年来发表在《昆虫分类学报》、《动物分类学报》、《动物学研究》等科学期刊上研究贵州省昆虫的文献，迄今已报道贵州飞行昆虫21目408科，本次研究共鉴定出贵州威宁草海国家级自然保护区蚊和蚋共计18种。所见物种大部分为已知人、畜害虫，其中部分种有携带人、畜病原体报道。

本次在贵州威宁草海国家级自然保护区沿岸区域鉴定出蚊科3属10种，占贵州省记述种9.17%(蚊，10/109)。所见蚊种中，五指库蚊为贵州新记述，其分布在四川、云南已见报道 [1, 3]。据文献报道，威宁县属毕节、六盘水贵州高寒山区，其蚊类种属组成简单，仅见3属12种[1]，本次调查补充记述该地区库蚊3种(白纹伊蚊、致倦库蚊及三带喙库蚊)。所见种绝大部分具有重要医学意义，3种库蚊均能携带传播多种病原体 [1]。

本次还在贵州威宁草海国家级自然保护区四周水系鉴定出蚋科1属8种，占贵州记述种21.62%(蚋，8/37)，其中窄足真蚋和昌隆蚋为贵州省新记述。所见贵阳厌蚋幼虫、蛹与模式标本形态特征具有较大变异，条形码序列(COI基因)相似度却达99.6%～99.8%；其特征为(1)末龄幼虫腹节有刺栉、肛鳃三分支具有两到四条分支小叶，(2)蛹期具4或5条呼吸丝，同一个体左右两侧呼吸丝可不同，此现象在厌蚋亚属未成熟期中十分常见[2,26]。所见蚋种中，装饰短蚋、双齿蚋等嗜叮咬人、畜、禽，具有医学和兽医重要性。

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